首先看你枯孙的MARK亮不亮，如果MARK不亮的话说明EB少了，多加点EB。如果MARK亮的话，那就是你的PCR产物浓度不够，这个就原因多了1、增斗棚加引物浓度2、增加PCR循环数3、降低PCR退火温度以提高扩增效率4、DNA模板不纯，重新制备DNA模板，建议购买商品化提取试剂空败则盒5、增加上样量，这个意义不太大，10ul跟40ul的亮度区别不会特别大